Práctica: Observación de mitosis en meristemo de raíz de cebolla

Objetivo.
Hacer una preparación microscópica de células meristemáticas de la raíz de cebolla para localizar y diferenciar con el microscopio las distintas fases de la mitosis o cariocinesis.

Material.
Cebollas, microscopio, portaobjetos, cubreobjetos, lanceta, aguja enmangada, pinzas de madera, pinzas de punta fina, palillos, mechero, tijeras, papel de filtro, vaso de precipitados, vidrio de reloj, orceína A y orceína B.

Introducción:

La división celular es el fenómeno por el que una célula origina dos células hijas, cada una de las cuales recibe idéntica información genética. Consta de dos etapas: la cariocinesis o mitosis que asegura el reparto equitativo del material hereditario y la citocinesis o división del citoplasma.
La mitosis consta de las siguientes etapas: profase, metafase, anafase y telofase.
Protocolo:

Preparación previa. Tres o cuatro días antes de hacer la práctica se pone un bulbo de cebolla en un vaso de precipitados lleno de agua, de tal manera que la parte inferior del mismo esté en contacto con el agua. Al cabo de esos tres o cuatro días se habrán formado numerosas raicillas, cuyos ápices se utilizarán en esta práctica. Conviene realizar la práctica cuando las raicillas todavía no han crecido demasiado.

1. Con una tijera se corta el extremo de varias raicillas, procurando que su longitud sea de unos 2 a 3 mm., ya que es en esta zona de la raíz donde se encuentran las células en división.

2. Se depositan los trozos de raíz en un vidrio de reloj, en el que previamente se han vertido de 2 a 3 ml de orceína A, cuya función es la de reblandecer las membranas celulares.

3. Con ayuda de unas pinzas de madera se calienta el vidrio de reloj a la llama del mechero durante 8 minutos, teniendo gran cuidado de que no entre en ebullición (si es necesario se retirará el vidrio de reloj para que no se produzca la ebullición); el calentamiento termina cuando se observa la emisión de unos tenues vapores.

4. Se coge con las pinzas de punta fina uno de los extremos (ápice) de la raíz y se coloca en un portaobjetos añadiendo una gota de orceína B y se deja actuar durante un minuto. La función de la orceína B es la de completar el proceso de teñido de los cromosomas.
5. Hacer un squash:
Sobre el cubreobjetos se colocan unas tiras de papel de filtro, más o menos 5 o 6 trocitos, y luego se presiona suavemente con la yema del dedo pulgar haciendo un giro de más o menos 60º, para así conseguir que las células queden en un solo plano y se elimine el exceso de colorante.
Sin necesidad de retirar el papel de filtro se golpea, también suavemente, con el extremo romo de una aguja enmangada o bien con el extremo plano de un lápiz para completar la disgregación de las células meristemáticas.
6. Se observa la preparación con el microscopio empezando con el objetivo de menor aumento para luego utilizar los de mayor aumento.

Imágenes práctica epidermis lirio-cebolla

Práctica 4: "Observación de epidermis de lirio y cebolla"

OBJETIVO
MATERIAL
INTRODUCCIÓN
PROTOCOLO
RESULTADOS Y CUESTIONES
INFORMACIÓN EN LA RED

OBJETIVOObservar la morfología típica de las células vegetales y la presencia de estomas. Practicar las técnicas de tinción de preparaciones microscópicas.

MATERIAL DE TRABAJOMicroscopio. Portaobjetos. Cubreobjetos. Pinzas. Bisturí. Tijeras. Colorante (verde de metilo acético). Placa de Petri. Papel de filtro. Frasco lavador. Libro de texto. Lápices de colores.
MATERIAL DE ESTUDIOHojas de lirio, de tulipán, de gladiolo, de cebolla, de puerros, y en general hojas de plantas monocotiledóneas.

INTRODUCCIÓNAntes de realizar esta práctica es conveniente repasar el manejo del microscopio y todo lo relativo a la morfología de las células vegetales.
La EPIDERMIS es un tejido formado por una única capa de células unidas entre sí, sin dejar espacios intercelulares. Se encuentra en las hojas, tallo y raíces de las plantas jóvenes. Sus células no poseen cloroplastos y pueden estar engrosadas exteriormente con materiales lipídicos, formando una capa impermeable llamada cutina. Cuando esto es así, la capa de cutina impide el necesario intercambio de agua y gases con la atmósfera, por lo que aparecen, especialmente en el envés de las hojas, unas estructuras denominadas estomas que hacen posible ese intercambio. Los estomas poseen un mecanismo que regula su apertura y cierre.
La epidermis es un tejido protector cuya función es la de proteger al vegetal de la desecación y de la agresión de los agentes externos. En la raíz permite la absorción de agua y sales minerales.
PROTOCOLO
1.- Con ayuda del bisturí y de las pinzas arranca un pequeño trozo de la epidermis de la hoja de lirio, procurando que sea lo más transparente posible, recuerda que las células de la epidermis carecen de cloroplastos. Ten cuidado de no arrancar también parte del parénquima, tejido de color verde, ya que sus células si tienen cloroplastos y que se encuentra por debajo de la epidermis. Si el trozo arrancado es muy grande corta un pequeño cuadrado de 5 mm de lado, que será suficiente.


2.- Deposita el fragmento en un portaobjetos en el que previamente has echado una gota de agua. Procura que el fragmento de epidermis no se arrugue.
3.- Con el portaobjetos situado encima de la placa de Petri, añade a la muestra unas gotas de colorante verde de metilo acético y espera, más o menos 5 minutos, para que este ejerza su acción.Verde metilo acético: 1 gramo de colorante en polvo, 100 ml de alcohol etílico y 1 ml de ácido acético glacial.
4.- Transcurrido los cinco minutos, elimina el colorante vertiendo agua sobre la muestra, que habrás sujetado al porta con ayuda de unas pinzas. El exceso de agua o de colorante que queda en los alrededores de la muestra se seca con un trozo de papel de filtro.
5.- Añade unas 2 ó 3 gotas de agua y con cuidado coloca el cubreobjetos sobre el fragmento de epidermis, cuidando de que no queden burbujas de aire entre el cubre y el portaobjetos.
6.- Observa al microscopio comenzando con el objetivo de menor aumento, para luego ir pasando a otros de mayor aumento.
La forma de las células epidérmicas y la de los estomas depende del tipo de planta que estemos estudiando. En ocasiones el ostiolo no se ve por encontrarse cerrado; en estos casos se debe preparar otra muestra utilizando una hoja que esté recién cortada, ya que los ostiolos suelen estar cerrados en las hojas marchitas o bien que llevan mucho tiempo cortadas.

Prácticas de biología curso 2007 -08

Práctica : "Observación bacterias del yogur"

Observación de bacterias
OBJETIVOS
Realizar una tinción simple de bacterias procedentes de distintas muestras naturales.
Realizar dos tipos de fijaciones bacterianas y saber en qué casos se recomienda una u otra.
Observar la morfología bacteriana y aprender a distinguir los distintos tipos de agrupaciones que existen.
Practicar con el microscopio al máximo aumento y con el correcto empleo del aceite de inmersión.
MATERIAL
Mechero Bunsen o de alcohol
Asa de siembra o aguja enmangada
Pinzas
Portaobjetos
Muestras bacterianas de origen natural: yogur.
Colorantes para tinción:a Azul de metileno al 1%
Microscopio y aceite de inmersión
BACTERIAS DEL YOGUR
El yogur es un producto lácteo producido por la fermentación natural de la leche. A escala industrial se realiza la fermentación añadiendo a la leche dosis del 3-4% de una asociación de dos cepas bacterianas: el Streptococcus termophilus, poco productor de ácido, pero muy aromático, y el Lactobacillus bulgaricus, muy acidificante. En esta preparación se podrán, por tanto, observar dos morfologías bacterianas distintas (cocos y bacilos) y un tipo de agrupación (estreptococos, cocos en cadenas arrosariadas). Además, el tamaño del lactobacilo (unos 30µm de longitud) facilita la observación aunque no se tenga mucha práctica con el enfoque del microscopio.
DESARROLLO DE LA PRÁCTICA:
Realizar el frotis disolviendo una mínima porción de yogur en una pequeña gota de agua.
Fijar con metanol para eliminar parte de la grasa.
Teñir con azul de metileno durante 1-2 minutos.
Observar al máximo aumento del microscopio (objetivo de 100) añadiendo previamente una gota de aceite de inmersión
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