Objetivo.Hacer una preparación microscópica de células meristemáticas de la raíz de cebolla para localizar y diferenciar con el microscopio las distintas fases de la mitosis o cariocinesis.
Material.
Cebollas, microscopio, portaobjetos, cubreobjetos, lanceta, aguja enmangada, pinzas de madera, pinzas de punta fina, palillos, mechero, tijeras, papel de filtro, vaso de precipitados, vidrio de reloj, orceína A y orceína B.
Introducción:
La división celular es el fenómeno por el que una célula origina dos células hijas, cada una de las cuales recibe idéntica información genética. Consta de dos etapas: la cariocinesis o mitosis que asegura el reparto equitativo del material hereditario y la citocinesis o división del citoplasma.
La mitosis consta de las siguientes etapas: profase, metafase, anafase y telofase.
Protocolo:
Preparación previa. Tres o cuatro días antes de hacer la práctica se pone un bulbo de cebolla en un vaso de precipitados lleno de agua, de tal manera que la parte inferior del mismo esté en contacto con el agua. Al cabo de esos tres o cuatro días se habrán formado numerosas raicillas, cuyos ápices se utilizarán en esta práctica. Conviene realizar la práctica cuando las raicillas todavía no han crecido demasiado.
1. Con una tijera se corta el extremo de varias raicillas, procurando que su longitud sea de unos 2 a 3 mm., ya que es en esta zona de la raíz donde se encuentran las células en división.
2. Se depositan los trozos de raíz en un vidrio de reloj, en el que previamente se han vertido de 2 a 3 ml de orceína A, cuya función es la de reblandecer las membranas celulares.
3. Con ayuda de unas pinzas de madera se calienta el vidrio de reloj a la llama del mechero durante 8 minutos, teniendo gran cuidado de que no entre en ebullición (si es necesario se retirará el vidrio de reloj para que no se produzca la ebullición); el calentamiento termina cuando se observa la emisión de unos tenues vapores.
4. Se coge con las pinzas de punta fina uno de los extremos (ápice) de la raíz y se coloca en un portaobjetos añadiendo una gota de orceína B y se deja actuar durante un minuto. La función de la orceína B es la de completar el proceso de teñido de los cromosomas.
5. Hacer un squash:
Sobre el cubreobjetos se colocan unas tiras de papel de filtro, más o menos 5 o 6 trocitos, y luego se presiona suavemente con la yema del dedo pulgar haciendo un giro de más o menos 60º, para así conseguir que las células queden en un solo plano y se elimine el exceso de colorante.
Sin necesidad de retirar el papel de filtro se golpea, también suavemente, con el extremo romo de una aguja enmangada o bien con el extremo plano de un lápiz para completar la disgregación de las células meristemáticas.
6. Se observa la preparación con el microscopio empezando con el objetivo de menor aumento para luego utilizar los de mayor aumento.
